Diss.: Untersuchung zur Atemwegsreagibilität /Pferd

http://elib.tiho-hannover.de/dissertati ... j_ws04.pdf

Julia Vietmeier
Untersuchung zur Atemwegsreagibilität an „Precision Cut Lung Slices“ (PCLS)
beim Pferd.
Ziel dieser Arbeit war es die Methodik zur Erstellung von Precision Cut Lung Slices
(PCLS), die von MARTIN et al. (1996) für die Mäuselungen beschrieben wurde, für
die Anwendung an equinem Lungengewebe zu etablieren.
Lungen von 12 Pferden dienten zur Erarbeitung einer Methodik, PCLS aus equinem
Lungengewebe zu gewinnen. Dies umfasste die Herausnahme des Gewebes über
einen interkostalen Zugang, die Befüllung mit Agarose und das Schneiden der PCLS
mit einem speziellen Mikrotom. Weiterhin wurde ein Versuchsaufbau entwickelt, um
die pharmakologische Beeinflussbarkeit der gewonnenen PCLS untersuchen zukönnen.
An weiteren 10 Pferden wurde die erarbeitete Methodik unter standardisierten
Bedingungen überprüft. An allen Pferden erfolgte eine klinische
Allgemeinuntersuchung, eine spezielle Untersuchung der Atemwege, eine arterielle
Blutgasanalyse und eine endoskopische Untersuchung der tiefen Atemwege mit
Entnahme von Tracheobronchialsekret einen Tag vor der Euthanasie. Die Entnahme
des Lungengewebes erfolgte unmittelbar post mortem, um die Vitalität des Gewebes
zu erhalten. Nach dem Anfertigen der ca. 250 mm dicken PCLS wurden diese unter
Zellkulturbedingungen bei 37°C inkubiert. Es folgten mehrere Mediumwechsel bis die
PCLS schließlich unter dem Mikroskop auswertbar waren. Die Vitalität der PCLS,
feststellbar über den Zilienschlag des Flimmerepithels, war mindestens 24 Stunden
vorhanden.
Der bronchokonstriktorische Einfluss verschiedener pharmakologisch wirksamer
Substanzen, in Abhängigkeit zum Atemwegsquerschnitt, wurde bestimmt. Die
Ergebnisse der ex-vivo-Untersuchungen wurden in Bezug gesetzt zu eventuell vorhandenen Lungenerkrankungen der Pferde. Durch die Applikation von Metacholin
bzw. Histamin (jeweils als Hydrochlorid) zu den PCLS konnte dosisabhängig eine
Bronchokonstriktion induziert werden. Es wurden für beide Substanzen
Konzentrations-Wirkungskurven ermittelt. Eine induzierte Bronchokonstriktion konnte
durch Wechsel des Mediums mit Zugabe von Clenbuterol wieder aufgehoben
werden. Es zeigten sich Unterschiede in der Dilatationsbereitschaft zwischen PCLS
aus Lungengewebe von lungengesunden und geringgradig an COB erkrankten
Pferden und PCLS, die aus Lungengewebe von hochgradig an COB erkrankten
Pferden gewonnen wurden.
In der vorliegenden Studie wurden die Grundlagen für Untersuchungen an PCLS zur
Reagibilität, einer eventuellen Hyperreagibilität sowie zur Beeinflussung der
Reagibilität durch unterschiedliche pharmakologische Substanzen quantitativ ex- vivo
beim Pferd erarbeitet. Durch die Vielzahl an PCLS pro Pferd können verschiedene
pharmakologische Studien an einem Probanden geprüft werden, so dass auch die
Anzahl erforderlicher Tierversuche vermindert wird.